Вы здесь

Инновационные подходы и культивирование гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови для трансплантации в онкологии

На данный момент наиболее распространенным способом лечения онкологических заболеваний крови в России является трансплантация гемопоэтических стволовых клеток костного мозга (ГСК КМ). Однако в составе ГСК КМ обнаруживаются высокоиммуногенные вещества и белки, способные вызывать реакцию «трансплантат против хозяина». В связи с достигнутыми в последнее время успехами в области клеточных технологий, созданием и развитием Общественных регистров доноров стволовых клеток пуповинной крови с полным молекулярно-генетическим HLA-типированием, получило активное развитие новое направление в медицине – трансплантация ГСК пуповинной крови (ПК).

ГСК ПК получают из плаценты при рождении ребенка. С 1989 г. трансплантацию ГСК ПК применяют для лечения многих злокачественных заболеваний крови, таких как лейкемия, лимфома, множественная миелома, талассемия, а также некоторых доброкачественных заболеваний – аплазии костного мозга, врожденных дефектов кроветворения и иммунитета, диабета и ряда неврологических расстройств [1]. ГСК ПК по сравнению с другими источниками обладает рядом преимуществ: атравматичность получения материала, высокая репопулирующая способность клеток ПК [4], а также менее строгие требования к совместимости по системе HLA-трансплантата и реципиента (несовместимость от одного до трех антигенов) [2, 3]. В настоящее время хорошо отработаны методики сбора и длительного хранения ПК в замороженном состоянии, что увеличивает вероятность получения образцов с редким HLA-типом и сокращает время поиска HLA-совместимого трансплантата для аллогенной трансплантации с 4–6 месяцев как при поиске донора костного мозга до 4–6 дней [13]. ГСК ПК обычно идентифицируют по наличию на их поверхности гликофосфопротеина CD34+, а также на основании их функциональных свойств путем исследования клоногенности или колониеобразования (КОЕ) in vitro.

С другой стороны, использование ГСК ПК для лечения взрослых пациентов до сих пор остается ограниченным. Одной из главных причин этого является малый объем образца ПК по сравнению с объемом КМ, что может приводить к замедлению приживления или отторжению трансплантированного образца. Считается, что определяющим фактором успеха трансплантации является количество ГСК и общая клеточность, то есть количество ядросодержащих клеток, образца ПК [14]. Это обуславливает ограниченность применения ГСК ПК для лечения взрослых пациентов. Поэтому среди прочих методов улучшения исходов трансплантации ГСК ПК актуальной является проблема чистого выделения и экспансии CD34+ ГСК in vitro.

Несмотря на ряд успешных исследований в данной области, на данный момент отсутствует общепринятый стандартизированный протокол экспансии ГСК ПК in vitro с оптимальными комбинациями и концентрациями цитоткинов [5, 6]. Известно, что пролиферативный потенциал и «стволовость» поддерживается некоторым набором цитокинов. Составы цитокиновых коктейлей, приведенных в литературе, различаются и набором цитокинов, и концентрацией каждого (таблицу 1). Помимо цитокинов исследователи описывают методы культивирования ГСК с использованием подложки из мезенхимальных стволовых клеток (МСК) [7], которые при сокультивировании выделяют растворимые факторы для поддержания пролиферации и замедления дифференцировки CD34+–клеток ПК.

В связи с вышеперечисленными фактами и возрастающей частотой опухолевых и других типов заболеваний, при лечении которых перспективным подходом считается применение ГСК ПК, очевидна необходимость создания унифицированного протокола культивирования ГСК ПК.

Таким образом, целью данной работы является подбор условий для выделения чистой фракции CD34+–клеток из ПК и культивирования популяции CD34+–клеток при сохранении их пролиферативной активности и уменьшении степени дифференцировки.

Полный текст статьи:
Читать полный текст статьи в формате pdf
Номер журнала: 
Раздел: